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本产品应用于免疫印迹实验，以化学发光法检测蛋白质。其原理是以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体直接或间接结合膜上的目的蛋白质，在洗膜后加入本试剂盒配制的ECL工作液，即可由HRP催化发出荧光。

本产品对抗原的最低检测限可达到中飞克级，在Western blot实验中，一抗(1mg/mL)储存液可稀释1:1,000至1:50,000倍，二抗(1mg/mL)储存液可稀释1:50,000至1:200,000倍。发光信号持久，结果可以通过X光胶片曝光或者其他适当荧光成像设备进行检测。

• 本ECL试剂盒灵敏度高，需要优化好上样量、一抗、二抗浓度和稀释液、印迹膜及封闭试剂，并按照蛋白表达丰度，参考推荐的抗体稀释比例，来获得最佳实验结果。
  
• 如果印迹膜上条带过亮时，建议使用我公司生产的膜再生液(LA10969)去除抗体后重新封闭孵育，
  并提高一抗二抗稀释比例。如果条带过暗也可将二抗稀释比例降低至1:5000至1:10,000倍，以达到最佳效果。
  
• 本试剂盒A液和B液不可以相互污染，否则会降低产品的使用效果。
  
• 发光强度会随时间缓慢减弱，建议在两小时内完成实验。
  
• 孵育二抗后，洗膜缓冲液应避免使用叠氮钠，叠氮钠是HPR的抑制剂。
  
• 为了您的安全和健康，请穿戴实验服并戴一次性手套操作。

• 进行常规Western Blot。
  
• ECL工作液按照1:1的比例等体积混合适量A液和B液制备。
  注：工作液最好在临近使用前配制，推荐使用剂量：0.1mL工作液/cm2膜。
  
• 用镊子取出洗好的膜，沥干膜上洗膜液，将结合有蛋白的一面朝上，放置于洁净保鲜膜上。
  
• 加上配好的ECL工作液，孵育时确保工作液覆盖整张膜，室温孵育1～2min。
  
• 弃去印迹膜上ECL工作液，将一张洁净的保鲜膜平整的铺在印迹膜上。
  
• 将处理好的印迹膜置于X光片盒中，在暗室中取一张胶片小心置于膜上，曝光时间取决于膜上的发光强度，曝光后立即显影定影，或将印迹膜放置到荧光成像仪内，按仪器说明书进行检测。